1434章 摸着石头过河 (第2/3页)
背角的电活动，当检测到异常高频放电时，自动释放GABA能激动剂；正常放电时，不释放。“
“但GABA能激动剂怎么局部释放？“汉斯皱眉，“全身给药会穿过血脑屏障，导致镇静、认知障碍。局部给药需要植入泵，感染风险高。“
“不需要外源性药物，“杨平摇头，“我们可以用光遗传学。“
“光遗传学？“曼因斯坦瞪大眼睛，“在灵长类身上？“
“对，“杨平点头，“2016年就有团队在恒河猴的视觉皮层做了光遗传学实验，证明了安全性和可行性。我们的方案是：用病毒载体把光敏感离子通道，比如NpHR，一种氯离子泵，导入M7脊髓背角的抑制性中间神经元。然后用植入式光纤，在检测到异常电活动时，发射黄光激活NpHR，增强局部抑制。“
“这太超前了，“唐顺倒吸一口凉气，“病毒载体、光遗传学、闭环调控，三个技术迭加在一起，任何一个出问题都是灾难。“
“但如果我们不做，“杨平看着他，“M7可能会在恢复运动功能的同时，承受慢性疼痛的折磨。你愿意看到它一边走路，一边痛得发抖吗？没有在分子层面提出有效解决方法之前，这是最好的方法。“
唐顺张了张嘴，没有说话。
韦伯打破了沉默：“杨教授，你的方案在理论上是成立的。但光遗传学在灵长类脊髓中的应用，还没有先例。我们需要做大量的预实验，验证病毒载体的靶向性、光刺激的深度、和长期安全性。“
“我知道，“杨平说，“所以我们分两步走。第一步，体外验证，在M7的脊髓切片上，测试病毒载体的转染效率和光刺激的效果。第二步，如果体外成功，再在M7身上做体内实验。“
“时间上呢？“伊娃问，“按照你的时间线，我们最多还有两到三周的时间窗。“
“体外验证需要一周，“杨平算了算，“如果成功，体内实验需要两到三天准备，一周内可以完成植入。刚好赶上。“
“如果失败呢？“曼因斯坦问。
杨平沉默了几秒钟，然后说：“那就用备选方案，鞘内注射巴氯芬，一种GABA_B受体激动剂。效果不如光遗传学精准，但可以全身性增强抑制性调控。副作用是肌张力降低，可能影响运动恢复。“
“所以光遗传学是A方案，巴氯芬是B方案，“韦伯总结，“我同意这个计划。但有一个条件，体外验证必须由我亲自来做，光遗传学是我的老本行，我在海德堡的时候做过类似的实验。“
“好，“杨平点头，“韦伯教授负责体外验证，伊娃负责闭环传感器升级，莉娜负责数据分析模型，汉斯负责病毒载体和光纤制备。唐顺，你协调所有资源，确保一周内出结果。“
“明白！“
体外验证开始。
韦伯亲自主刀，从M7的脊髓损伤区取了一小块组织，大约两立方毫米，放在冰冷的人工脑脊液中，切成了三百微米厚的薄片。这些薄片被转移到培养皿中，保持存活状态，可以持续记录电生理活动四到六个小时。
病毒载体是AAV9-hSyn-NpHR-EYFP，一种经过改造的腺相关病毒。AAV9对神经元有高度的嗜性，hSyn启动子确保NpHR只在神经元中表达，EYFP作为荧光标记，方便在显微镜下观察转染效率。
韦伯把病毒溶液滴在脊髓切片上，孵育两个小时。然后用PBS冲洗三遍，放在共聚焦显微镜下观察。
“转染效率，“他调整着焦距，“大约百分之三十五。“
“百分之三十五，“曼因斯坦在旁边记录，“够吗？“
“理论上，脊髓背角的抑制性中间神经元占总神经元数量的百分之二十到三十。百分之三十五的转染效率，意味着大部分抑制性神经元都能被靶向，足够了。“
下一步是电生理验证，韦伯把一片转染过的脊髓切片放到电生理记录槽中，用玻璃微电极记录背角神经元的自发放电。同
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